植物化學(xué)修飾的自然殺傷細(xì)胞重編程腫瘤微環(huán)境以實(shí)現(xiàn)實(shí)體瘤的強(qiáng)效免疫治療

更新時(shí)間：2025-06-27 | 點(diǎn)擊率：40

文獻(xiàn)標(biāo)題：Phytochemical natural killer cells reprogram tumor microenvironment for potent immunotherapy of solid tumors

發(fā)表期刊：Biomaterials

IF：15.304

一作單位：北京理工大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院

研究背景

過(guò)繼性細(xì)胞移植(ACT)是通過(guò)體外激活擴(kuò)增供體淋巴細(xì)胞來(lái)誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng)，自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)在ACT中具有毒性較低、反應(yīng)率更高及作用譜更廣等明顯優(yōu)勢(shì)。此外，由于NK細(xì)胞缺乏抗原特異性表面受體且不會(huì)引發(fā)移植物抗宿主病(GvHD)，使用同種異體NK細(xì)胞可加速治療進(jìn)程。

激活NK細(xì)胞以增強(qiáng)其細(xì)胞毒性是提升NK療法療效的關(guān)鍵。基因工程是目前普遍的NK細(xì)胞激活手段，然而NK細(xì)胞的轉(zhuǎn)染和基因操作難度遠(yuǎn)高于T細(xì)胞，且基因工程產(chǎn)物仍存在諸多問(wèn)題。作為替代方案，糖工程改造和脂質(zhì)體修飾等化學(xué)修飾方法也有報(bào)道，但這些方法通常存在效率低、穩(wěn)定性差的缺陷。

即便實(shí)現(xiàn)了有效激活，要在實(shí)體瘤中充分發(fā)揮過(guò)繼性NK細(xì)胞的治療潛力仍十分困難，因?yàn)槟[瘤微環(huán)境(TME)中的多種免疫抑制機(jī)制會(huì)嚴(yán)重?fù)p害NK細(xì)胞的效應(yīng)功能。特別是缺氧條件和活性氧簇(ROS)會(huì)顯著抑制其抗腫瘤活性，甚至誘發(fā)NK細(xì)胞凋亡；而白細(xì)胞介素-37(IL-37)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)等癌癥相關(guān)因子還會(huì)通過(guò)多種途徑對(duì)NK功能產(chǎn)生負(fù)面影響。目前針對(duì)免疫抑制性TME的逆轉(zhuǎn)方案僅限于使用抑制劑或靶向分子，但這些方案通常僅針對(duì)特定免疫逃逸相關(guān)因子，而TME對(duì)NK細(xì)胞的影響是普遍的，因此效果欠佳。迄今為止，能克服TME多重抑制作用的方案并不多，更遑論同時(shí)實(shí)現(xiàn)TME抑制解除與NK細(xì)胞激活的雙重目標(biāo)。

本研究通過(guò)賦予NK細(xì)胞植物化學(xué)特性，實(shí)現(xiàn)了對(duì)實(shí)體瘤的有效免疫治療。通過(guò)膜融合技術(shù)，用天然類(lèi)囊體(Tk)膜修飾NK細(xì)胞，構(gòu)建出植物化學(xué)修飾的NK細(xì)胞(PC-NKs)。這種Tk工程化處理能顯著激活NK細(xì)胞，Tk膜上的抗氧化酶可抑制糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)，進(jìn)而提升NK細(xì)胞中激活受體和細(xì)胞毒性效應(yīng)分子的表達(dá)水平。系統(tǒng)性給藥后，PC-NKs細(xì)胞能精準(zhǔn)靶向腫瘤組織，并借助Tk膜上的過(guò)氧化氫酶深度重編程TME，從而顯著增強(qiáng)直接殺傷能力并激活免疫性TME。該方案在實(shí)現(xiàn)顯著治療效果的同時(shí)幾乎不引發(fā)異常反應(yīng)，直接殺傷作用與強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)的協(xié)同效應(yīng)產(chǎn)生了強(qiáng)大的抗癌效果，為開(kāi)發(fā)針對(duì)實(shí)體瘤的高效NK細(xì)胞療法提供了新思路。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.采用Tk膜改造NK細(xì)胞

通過(guò)膜融合技術(shù)，成功將Tk膜與NK細(xì)胞融合，形成PC-NKs細(xì)胞。該融合過(guò)程不影響NK細(xì)胞的活性和增殖能力，Tk組分被完整轉(zhuǎn)移至NK細(xì)胞，從而賦予NK細(xì)胞類(lèi)囊體植物化學(xué)功能。

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2.抗氧化酶顯著提升PC-NKs細(xì)胞毒性

Tk膜上的抗氧化酶通過(guò)分解細(xì)胞內(nèi)ROS，誘導(dǎo)GSK-3β抑制，進(jìn)而上調(diào)NF-κB和p-eIF2B水平，最終實(shí)現(xiàn)PC-NKs細(xì)胞的顯著活化。Tk工程有效促進(jìn)了NK細(xì)胞激活受體的表達(dá)，特別是核心受體NKG2D，同時(shí)降低了抑制性受體NKG2A的表達(dá)。NKG2D表達(dá)提升促進(jìn)了NK細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的特異性結(jié)合，進(jìn)而誘導(dǎo)靜息態(tài)NK細(xì)胞中溶解顆粒的極化，并刺激促炎細(xì)胞因子分泌。受體表達(dá)水平與細(xì)胞毒性效應(yīng)分子分泌的同步顯著增強(qiáng)，共同證實(shí)了Tk對(duì)NK細(xì)胞的有效激活作用。因此，PC-NKs細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞展現(xiàn)出比天然NK細(xì)胞更強(qiáng)的細(xì)胞毒性。

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3.PC-NKs細(xì)胞有效誘導(dǎo)免疫反應(yīng)

除了直接殺傷腫瘤細(xì)胞外，NK細(xì)胞在協(xié)調(diào)和啟動(dòng)抗癌適應(yīng)性免疫反應(yīng)中也發(fā)揮著關(guān)鍵作用。高活性的PC-NKs細(xì)胞能產(chǎn)生多種免疫調(diào)節(jié)相關(guān)分子，DNAM-1、FLT3L和CCL5這些關(guān)鍵配體不僅能將樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)募集至TME并促進(jìn)其成熟，增強(qiáng)成熟DC激活T細(xì)胞的能力。同時(shí)還能通過(guò)受體-配體相互作用誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化，將M2型巨噬細(xì)胞重編程為M1型表型，被PC-NKs細(xì)胞處理后的M2型巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬率顯著上升。除了通過(guò)吞噬作用直接殺傷腫瘤細(xì)胞外，M1型巨噬細(xì)胞還能有效產(chǎn)生H?O?，這有利于PC-NKs細(xì)胞誘導(dǎo)的TME氧合作用，證實(shí)了PC-NKs細(xì)胞顯著的免疫調(diào)節(jié)能力。

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4.PC-NKs細(xì)胞顯著緩解TME缺氧

由于過(guò)氧化氫酶作用，腫瘤細(xì)胞和TME中大量存在的H?O?會(huì)被PC-NKs細(xì)胞高效氧化，從而實(shí)現(xiàn)H?O?濃度下降與O?含量上升的同步效應(yīng)。H?O?分解與缺氧緩解對(duì)過(guò)繼性NK治療具有特殊意義。一方面，高濃度的H?O?易影響NKs的活性與功能。通過(guò)Tk膜上的過(guò)氧化氫酶作用，對(duì)NK細(xì)胞進(jìn)行工程化改造，能在高H?O?水平環(huán)境中有效提升其活性，從而使PC-NKs細(xì)胞在實(shí)體瘤中的抗腫瘤性能顯著增強(qiáng)。另一方面，腫瘤組織中的缺氧環(huán)境會(huì)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞表面NKG2D的特異性配體MIC分子脫落，從而促進(jìn)其對(duì)免疫監(jiān)視的抵抗。PC-NKs細(xì)胞上NKG2D表達(dá)量的增加以及腫瘤細(xì)胞上MICA分子的表達(dá)，使得PC-NKs細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間能夠形成有效的受體-配體結(jié)合，這是NK細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞殺傷作用所必需的條件。此外，PC-NKs細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)的腫瘤聚集性和明顯更慢的清除速率，證實(shí)了其更具活性的腫瘤靶向與識(shí)別能力。

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5.PC-NKs細(xì)胞顯著的體內(nèi)抗腫瘤效果

PC-NKs細(xì)胞治療組表現(xiàn)出更強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)和更低的腫瘤細(xì)胞增殖活性，腫瘤抑制率顯著升高，腫瘤生長(zhǎng)顯著延緩，腫瘤組織中更多癌細(xì)胞出現(xiàn)結(jié)構(gòu)改變或死亡，腫瘤重量和體積顯著降低，小鼠生存期顯著延長(zhǎng)，并且未觀察到肺轉(zhuǎn)移跡象，轉(zhuǎn)移指數(shù)與分級(jí)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)PC-NKs細(xì)胞治療顯著減輕了肺轉(zhuǎn)移負(fù)荷，驗(yàn)證了PC-NKs療法相較于傳統(tǒng)過(guò)繼性NK療法的抗腫瘤性能。此外，PC-NKs細(xì)胞治療組小鼠的主要器官未出現(xiàn)明顯損傷，體重和血液生化指標(biāo)均無(wú)異常，驗(yàn)證了該療法作為癌癥治療手段的安全性。

PC-NKs細(xì)胞的浸潤(rùn)能力顯著增強(qiáng)，這可能源于其高度活化和改善的腫瘤富集特性。PC-NKs細(xì)胞浸潤(rùn)的增加顯著促進(jìn)了DC細(xì)胞的成熟，增強(qiáng)成熟DC激活T細(xì)胞的能力。除免疫細(xì)胞外，免疫刺激細(xì)胞因子也是評(píng)估免疫反應(yīng)的重要指標(biāo)，PC-NKs細(xì)胞治療組能誘導(dǎo)高水平的TNF-α和IFN-γ分泌，同時(shí)產(chǎn)生低量的TGF-β。這些數(shù)據(jù)共同證明，在荷瘤小鼠模型中，PC-NKs療法比單一NK療法具有更強(qiáng)的免疫刺激能力，從而產(chǎn)生更優(yōu)異的抗腫瘤治療效果。

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6.PC-NKs細(xì)胞誘導(dǎo)長(zhǎng)期免疫記憶

PC-NKs細(xì)胞治療組中能夠進(jìn)行主要組織相容性復(fù)合體(MHC)I類(lèi)分子介導(dǎo)的交叉呈遞(CD11c+MHCI+ DCs)的成熟DCs比例更高，促進(jìn)了具有優(yōu)異克隆多樣性和細(xì)胞毒活性的T細(xì)胞增殖。因此，PC-NKs細(xì)胞治療能夠促進(jìn)建立有效的免疫記憶效應(yīng)，這對(duì)于良好的癌癥預(yù)后至關(guān)重要。

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討論

通過(guò)膜融合方式用囊泡修飾NK細(xì)胞，在保持NK細(xì)胞活力和增殖能力的同時(shí)，通過(guò)抗氧化酶激活的ROS-GSK3β–NF–κB/eIF2B信號(hào)通路顯著增強(qiáng)了其活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，激活配體NKG2D與細(xì)胞毒性效應(yīng)分子的表達(dá)顯著提升，NK細(xì)胞的抗腫瘤細(xì)胞毒性明顯增強(qiáng)。經(jīng)系統(tǒng)性給藥后，高度活化的PC-NKs細(xì)胞高效富集于腫瘤組織，在分解H?O?的同時(shí)改善TME的缺氧狀態(tài)。這使腫瘤細(xì)胞表面配體MICA的表達(dá)水平大幅上升，進(jìn)而強(qiáng)化了NK細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的結(jié)合體形成，顯著提升了腫瘤殺傷能力。此外，PC-NKs細(xì)胞能有效重編程針對(duì)腫瘤的免疫應(yīng)答，使細(xì)胞毒性免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子得到明顯改善。直接殺傷作用與多重免疫調(diào)節(jié)功能的協(xié)同效應(yīng)，在實(shí)體瘤治療中展現(xiàn)出令人振奮的抗癌效果。顯然，將Tk植物活性成分轉(zhuǎn)移至NK細(xì)胞，極大提升了其在實(shí)體瘤治療中的表現(xiàn)。該策略還具有快速、簡(jiǎn)便、無(wú)需基因改造等特點(diǎn)，可推廣至其他基于細(xì)胞的療法。

T細(xì)胞與TME中的ROS廣泛參與T細(xì)胞的失活、凋亡及功能抑制，因此，用Tk對(duì)T細(xì)胞進(jìn)行工程化改造，也將成為提升T細(xì)胞腫瘤免疫應(yīng)答和治療效能的潛力策略。同理，只要其他淋巴細(xì)胞活性受ROS和缺氧影響，理論上均可通過(guò)Tk膜融合技術(shù)提升其活性。下一代PC-NKs產(chǎn)品可通過(guò)工程化改造分泌游離因子或呈遞膜結(jié)合受體，從而增強(qiáng)體內(nèi)增殖與持久性、腫瘤歸巢及浸潤(rùn)能力，并進(jìn)一步提升NK細(xì)胞的殺傷效力。

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